Produção Científica https://repositoriobiologico.com.br//jspui/handle/123456789/1 2026-09-04T09:09:56Z 2026-09-04T09:09:56Z Martinelli, Giovanne Lopes https://repositoriobiologico.com.br//jspui/handle/123456789/1326 2026-08-21T16:56:04Z 2026-01-01T00:00:00Z

Title: A possível glicoproteína dos kitavírus e a indução de morte celular vegetal Authors: Martinelli, Giovanne Lopes Abstract: A leprose dos citros (LC) é uma das principais doenças virais que acometem a citricultura brasileira, com prejuízos recorrentes atribuídos ao citrus leprosis virus C (CiLV-C, Cilevirus leprosis), membro do gênero Cilevirus, família Kitaviridae. Dentre suas linhagens, a estirpe CRD é a mais estudada, servindo como referência para análises funcionais e moleculares. A proteína P61, codificada pela ORF p61 em seu RNA2, é uma possível glicoproteína com funções compatíveis a de uma efetora viral. Sua expressão transiente em Nicotiana benthamiana induz: a) sintomas similares aos de resposta de hipersensibilidade (HR-like), b) estresse do retículo endoplasmático (RE) e c) ativação de resposta a proteínas mal dobradas (UPR), resultando em morte celular programada (PCD), efeitos semelhantes aos observados durante a infecção por CiLV-C. Neste trabalho, análises in silico avaliaram características estruturais de proteínas homólogas à P61 de CiLV-C_CRD codificadas por diferentes kitavírus. Análises bioinformáticas de 13 proteínas homólogas revelaram baixa identidade de sequência entre as proteínas analisadas, mas conservação de características estruturais, como a presença de peptídeo sinal, domínios transmembrana, sítios de N-glicosilação e localização subcelular no RE. Motivos funcionais conservados e modificações pós-traducionais também foram detectados. As variantes da ORF p61 de CiLV-C das estirpes CRD e SJP foram clonadas no vetor binário pCAMBIA 2300 contendo o promotor CaMV 35S e sequência ômega do vírus do mosaico do fumo (tobacco mosaic virus, TMV). A expressão transiente em N. benthamiana revelou que a P61 da estirpe SJP induz sintomas HR-like mais intensos e promove mais precocemente a expressão relativa do gene bZIP60, marcador da via UPR, quando comparada à estirpe CRD. Os resultados demonstram que, apesar da diversidade genômica, as proteínas homólogas à P61 de CiLV-C_CRD compartilham características estruturais conservadas e potencial função ligada à patogênese. Esses achados contribuem para o avanço no entendimento dos mecanismos moleculares da infecção por kitavírus, além de oferecerem subsídios para a identificação de alvos virais conservados passíveis de exploração em estratégias de controle. Description: A leprose dos citros (LC) é uma das principais doenças virais que acometem a citricultura brasileira, com prejuízos recorrentes atribuídos ao citrus leprosis virus C (CiLV-C, Cilevirus leprosis), membro do gênero Cilevirus, família Kitaviridae. Dentre suas linhagens, a estirpe CRD é a mais estudada, servindo como referência para análises funcionais e moleculares. A proteína P61, codificada pela ORF p61 em seu RNA2, é uma possível glicoproteína com funções compatíveis a de uma efetora viral. Sua expressão transiente em Nicotiana benthamiana induz: a) sintomas similares aos de resposta de hipersensibilidade (HR-like), b) estresse do retículo endoplasmático (RE) e c) ativação de resposta a proteínas mal dobradas (UPR), resultando em morte celular programada (PCD), efeitos semelhantes aos observados durante a infecção por CiLV-C. Neste trabalho, análises in silico avaliaram características estruturais de proteínas homólogas à P61 de CiLV-C_CRD codificadas por diferentes kitavírus. Análises bioinformáticas de 13 proteínas homólogas revelaram baixa identidade de sequência entre as proteínas analisadas, mas conservação de características estruturais, como a presença de peptídeo sinal, domínios transmembrana, sítios de N-glicosilação e localização subcelular no RE. Motivos funcionais conservados e modificações pós-traducionais também foram detectados. As variantes da ORF p61 de CiLV-C das estirpes CRD e SJP foram clonadas no vetor binário pCAMBIA 2300 contendo o promotor CaMV 35S e sequência ômega do vírus do mosaico do fumo (tobacco mosaic virus, TMV). A expressão transiente em N. benthamiana revelou que a P61 da estirpe SJP induz sintomas HR-like mais intensos e promove mais precocemente a expressão relativa do gene bZIP60, marcador da via UPR, quando comparada à estirpe CRD. Os resultados demonstram que, apesar da diversidade genômica, as proteínas homólogas à P61 de CiLV-C_CRD compartilham características estruturais conservadas e potencial função ligada à patogênese. Esses achados contribuem para o avanço no entendimento dos mecanismos moleculares da infecção por kitavírus, além de oferecerem subsídios para a identificação de alvos virais conservados passíveis de exploração em estratégias de controle.

2026-01-01T00:00:00Z Fernandez, Eduardo Lipparelli https://repositoriobiologico.com.br//jspui/handle/123456789/1325 2026-08-20T17:17:53Z 2026-01-01T00:00:00Z

Title: Identificação e caracterização molecular de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste intradérmico para tuberculose na região de Limeira, São Paulo, Brasil Authors: Fernandez, Eduardo Lipparelli Abstract: A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose crônica de grande relevância para a saúde pública e animal, causada por Mycobacterium bovis, espécie integrante do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTBC). Além dos impactos sanitários, a doença ocasiona perdas produtivas, abates sanitários e restrições ao comércio nacional e internacional de animais e produtos de origem bovina. No Brasil, a bTB permanece como enfermidade endêmica, com variações regionais importantes em sua prevalência e risco epidemiológico. O presente estudo teve como objetivo isolar, identificar e caracterizar molecularmente cepas de M. bovis em bovinos naturalmente infectados, positivos ao Teste Cervical Comparativo (TCC), oriundos da região de Limeira, interior do estado de São Paulo. Amostras de tecidos com lesões compatíveis com tuberculose foram coletadas durante inspeções post mortem, submetidas a isolamento microbiológico em meios seletivos e posteriormente confirmadas quanto à presença de M. bovis por PCR convencional, com amplificação de fragmento específico de 500 pares de bases. Quatro isolados apresentaram positividade e foram submetidos à genotipagem por VNTR-MIRU, utilizando seis loci moleculares. A análise dos perfis multilocus revelou a existência de dois complexos clonais distintos (25–26 e 27–32), indicando diversidade genética intrarrebanho e sugerindo múltiplas rotas de introdução ou persistência de diferentes variantes do agente. Esses achados demonstram a aplicabilidade das ferramentas moleculares na vigilância epidemiológica da tuberculose bovina, contribuindo para a elucidação da dinâmica de infecção, rastreabilidade dos focos e aperfeiçoamento das estratégias de controle sanitário regional. Description: A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose crônica de grande relevância para a saúde pública e animal, causada por Mycobacterium bovis, espécie integrante do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTBC). Além dos impactos sanitários, a doença ocasiona perdas produtivas, abates sanitários e restrições ao comércio nacional e internacional de animais e produtos de origem bovina. No Brasil, a bTB permanece como enfermidade endêmica, com variações regionais importantes em sua prevalência e risco epidemiológico. O presente estudo teve como objetivo isolar, identificar e caracterizar molecularmente cepas de M. bovis em bovinos naturalmente infectados, positivos ao Teste Cervical Comparativo (TCC), oriundos da região de Limeira, interior do estado de São Paulo. Amostras de tecidos com lesões compatíveis com tuberculose foram coletadas durante inspeções post mortem, submetidas a isolamento microbiológico em meios seletivos e posteriormente confirmadas quanto à presença de M. bovis por PCR convencional, com amplificação de fragmento específico de 500 pares de bases. Quatro isolados apresentaram positividade e foram submetidos à genotipagem por VNTR-MIRU, utilizando seis loci moleculares. A análise dos perfis multilocus revelou a existência de dois complexos clonais distintos (25–26 e 27–32), indicando diversidade genética intrarrebanho e sugerindo múltiplas rotas de introdução ou persistência de diferentes variantes do agente. Esses achados demonstram a aplicabilidade das ferramentas moleculares na vigilância epidemiológica da tuberculose bovina, contribuindo para a elucidação da dinâmica de infecção, rastreabilidade dos focos e aperfeiçoamento das estratégias de controle sanitário regional.

2026-01-01T00:00:00Z Gonçalves, Cauane Raema Antunes https://repositoriobiologico.com.br//jspui/handle/123456789/1324 2026-08-11T18:28:37Z 2025-01-01T00:00:00Z

Title: Compatibilidade de Steinernema rarum com produtos químicos e biológicos usados na cana-de-açúcar, e efeitos de misturas na mortalidade de Sphenophorus levis Authors: Gonçalves, Cauane Raema Antunes Abstract: O Brasil é o maior produtor mundial da cana-de-açúcar. Atualmente, essa cultura é cultivada em mais de 10.000.000 hectares. Em 2023 foi produzido mais de 782 milhões de toneladas com um valor de produção de 101 bilhões de reais. A cultura apresenta vários desafios em seu gerenciamento, incluindo o ataque de insetos-pragas como o bicudo-da-cana (Sphenophorus levis) e doenças. Visando o aumento de produtividade, os produtores têm utilizado a tecnologia dos bioinsumos, mercado em crescimento no país, como os nematoides entomopatogênicos que controlam pragas do solo. O nematoide entomopatogênico Steinernema rarum PAM25 (espécie nativa do Brasil) é comprovado ser eficiente contra o S. levis. Para melhorar a tecnologia de aplicação e manejo integrado de pragas, esse trabalho objetivou-se a avaliar a compatibilidade e a infectividade do S. rarum com 19 espécies de bactérias, 5 fungos e 5 inseticidas químicos utilizados nos canaviais, a patogenicidade de bactérias e virulência de S. rarum em mistura com inseticidas químicos para adultos de S. levis. Avaliou-se a compatibilidade das bactérias (Rhizobium tropici, Nitrospirillum amazonense, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium japonicum, Priestia megaterium ATCC14581, Priestia aryabhattai 4005, Pseudomonas putida, Chromobacterium subtsugae, Pseudomonas protegens, Bacillus thuringiensis kurstaki, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis ATCC6051, Azospirillum brasiliense, Bacillus velezensis, Bacillus amyloliquefaciens CCT7690, Cytobacillus firmus, Pseudomonas fluorescens CCT2487, Bacillus methylotrophicus UFPEDA20), dos fungos (Beauveria bassiana IBCB 66, Isaria javanica IBCB 638, Metarhizium anisopliae IBCB 425, Purpureocillium lilacinum IBCB 130 e Trichoderma harzianum IBCB 1917) e dos inseticidas químicos (Bifentrina, Clorantraliniprole, Dinotefuram + Lambda-Cialotrina, Fipronil e Tiametoxan + Lambda-Cialotrina) com o nematoide, seus juvenis infectivos (JIs) foram colocados em contato com os tratamentos e sua mortalidade foi avaliada em diferentes intervalos de tempo. Para avaliar a infectividade, após os JIs serem colocados em contato com os tratamentos, foram aplicados em lagartas de Galleria mellonella, avaliado a mortalidade das lagartas e a confirmação da morte pelo nematoide. Realizou-se também um teste de patogenicidade de bactérias para adultos de S. levis e um de virulência de S. rarum em mistura com inseticidas químicos para adultos de S. levis. O S. rarum foi compatível e infectivo com todas as bactérias e fungos testados. Nos tratamentos em que o S. rarum foi exposto a Trichoderma harzianum IBCB 1917 e a Beauveria bassiana IBCB 66, as espécies potencializaram a ação do nematoide. Em relação aos inseticidas, após 24 horas apenas Dinotefuram + Lambda-Cialotrina apresentou redução nos nematoide vivos, porém isso não afetou negativamente a infectividade do S. rarum. Os produtos químicos não afetaram negativamente a infectividade dos JIs para larvas de G. mellonella após 24 horas de exposição. Nos testes em adultos de S. levis, todas as bactérias foram inócuas e apenas a Bifentrina, dentre os inseticidas, não foi inócua e ao ser misturada com S. rarum apresentou efeito sinergético, sendo assim um novo caminho para estudos futuros. Portanto, o S. rarum pode ser utilizado em associação com esses microrganismos e inseticidas químicos. Description: O Brasil é o maior produtor mundial da cana-de-açúcar. Atualmente, essa cultura é cultivada em mais de 10.000.000 hectares. Em 2023 foi produzido mais de 782 milhões de toneladas com um valor de produção de 101 bilhões de reais. A cultura apresenta vários desafios em seu gerenciamento, incluindo o ataque de insetos-pragas como o bicudo-da-cana (Sphenophorus levis) e doenças. Visando o aumento de produtividade, os produtores têm utilizado a tecnologia dos bioinsumos, mercado em crescimento no país, como os nematoides entomopatogênicos que controlam pragas do solo. O nematoide entomopatogênico Steinernema rarum PAM25 (espécie nativa do Brasil) é comprovado ser eficiente contra o S. levis. Para melhorar a tecnologia de aplicação e manejo integrado de pragas, esse trabalho objetivou-se a avaliar a compatibilidade e a infectividade do S. rarum com 19 espécies de bactérias, 5 fungos e 5 inseticidas químicos utilizados nos canaviais, a patogenicidade de bactérias e virulência de S. rarum em mistura com inseticidas químicos para adultos de S. levis. Avaliou-se a compatibilidade das bactérias (Rhizobium tropici, Nitrospirillum amazonense, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium japonicum, Priestia megaterium ATCC14581, Priestia aryabhattai 4005, Pseudomonas putida, Chromobacterium subtsugae, Pseudomonas protegens, Bacillus thuringiensis kurstaki, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis ATCC6051, Azospirillum brasiliense, Bacillus velezensis, Bacillus amyloliquefaciens CCT7690, Cytobacillus firmus, Pseudomonas fluorescens CCT2487, Bacillus methylotrophicus UFPEDA20), dos fungos (Beauveria bassiana IBCB 66, Isaria javanica IBCB 638, Metarhizium anisopliae IBCB 425, Purpureocillium lilacinum IBCB 130 e Trichoderma harzianum IBCB 1917) e dos inseticidas químicos (Bifentrina, Clorantraliniprole, Dinotefuram + Lambda-Cialotrina, Fipronil e Tiametoxan + Lambda-Cialotrina) com o nematoide, seus juvenis infectivos (JIs) foram colocados em contato com os tratamentos e sua mortalidade foi avaliada em diferentes intervalos de tempo. Para avaliar a infectividade, após os JIs serem colocados em contato com os tratamentos, foram aplicados em lagartas de Galleria mellonella, avaliado a mortalidade das lagartas e a confirmação da morte pelo nematoide. Realizou-se também um teste de patogenicidade de bactérias para adultos de S. levis e um de virulência de S. rarum em mistura com inseticidas químicos para adultos de S. levis. O S. rarum foi compatível e infectivo com todas as bactérias e fungos testados. Nos tratamentos em que o S. rarum foi exposto a Trichoderma harzianum IBCB 1917 e a Beauveria bassiana IBCB 66, as espécies potencializaram a ação do nematoide. Em relação aos inseticidas, após 24 horas apenas Dinotefuram + Lambda-Cialotrina apresentou redução nos nematoide vivos, porém isso não afetou negativamente a infectividade do S. rarum. Os produtos químicos não afetaram negativamente a infectividade dos JIs para larvas de G. mellonella após 24 horas de exposição. Nos testes em adultos de S. levis, todas as bactérias foram inócuas e apenas a Bifentrina, dentre os inseticidas, não foi inócua e ao ser misturada com S. rarum apresentou efeito sinergético, sendo assim um novo caminho para estudos futuros. Portanto, o S. rarum pode ser utilizado em associação com esses microrganismos e inseticidas químicos.

2025-01-01T00:00:00Z Coelho, Caroline Santos Gambini https://repositoriobiologico.com.br//jspui/handle/123456789/1323 2026-08-11T18:11:42Z 2025-01-01T00:00:00Z

Title: Análise da resistência de Rhipicephalus (Boophilus) microplus a organofosforados e investigação molecular do perfil resistente Authors: Coelho, Caroline Santos Gambini Abstract: A resistência do carrapato bovino, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, aos carrapaticidas é um problema econômico de grande importância mundial. No Brasil, o carrapato causa perdas acima de 3 bilhões de dólares anualmente. Portanto, é crucial compreender os mecanismos de resistência para auxiliar na identificação de métodos de controle mais eficazes. Dessa forma, este estudo teve como objetivo principal avaliar a resistência de dez populações de R. microplus da Região do Vale do Paraíba, estado de São Paulo, ao organofosforado (OF) clorpirifós, por meio do Teste de Pacote de Larvas (TPL) e investigar os mecanismos de resistência presentes. Também foi realizada a caracterização do perfil resistente da cepa denominada PINDA, que demonstrou o maior fator de resistência dentre as cepas estudadas, aos OF clorfenvinfós e clorpirifós, através do TPL, e uma triagem utilizando os acaricidas: doramectina, ivermectina, cipermetrina, fipronil, moxidectina e amitraz, por meio da Dose Diagnóstica (DD). Nos bioensaios TPL e DD, as larvas foram expostas por 24 horas aos acaricidas e após esse período foi feita a contagem para avaliação da mortalidade. Na DD, quatro níveis de resistência foram estabelecidos de acordo com a mortalidade das larvas. Os dados de mortalidade obtidos do TPL, foram submetidos a uma análise Probit para determinação dos valores da concentração letal para 50% (CL50) e os fatores de resistência (FR). As populações de campo foram consideradas resistentes quando a CL50 (IC95%) não se sobrepunha ao da cepa suscetível e o FR ≥ 2. A fim de investigar o mecanismo de resistência a OF, foram realizados ensaios de inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE) utilizando propoxur. Além disso, 5 amostras de cada cepa foram submetidas ao sequenciamento de Sanger para identificar possíveis mutações nos genes que codificam as enzimas AChE1 e AChE2. Nos bioensaios das populações de campo do Vale do Paraíba, os resultados demonstraram que 90% das cepas eram resistentes aos organofosforados (OF). O TPL-DD confirmou a multirresistência a carrapaticidas na cepa PINDA para cipermetrina, clorpirifós e amitraz. Enquanto, para as lactonas macrocíclicas (doramectina e moxidectina) se mostraram suscetíveis. Com relação aos OF, a cepa PINDA apresentou fator de resistência (FR) de 24,3 para clorpirifós e 10,3 para clorfenvinfós. No teste com inibidor enzimático, todas as cepas apresentaram diferença estatística em relação à cepa suscetível. Foi possível também identificar 14 mutações na sequência de aminoácidos da AChE1 e 19 na sequência da AChE2. Dentre essas mutações, 9 são inéditas, sendo 3 na AChE1 e 6 na AChE2. Esses achados sugerem que a resistência das cepas de campo aos organofosforados está associada à insensibilidade do sítio-alvo. Description: A resistência do carrapato bovino, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, aos carrapaticidas é um problema econômico de grande importância mundial. No Brasil, o carrapato causa perdas acima de 3 bilhões de dólares anualmente. Portanto, é crucial compreender os mecanismos de resistência para auxiliar na identificação de métodos de controle mais eficazes. Dessa forma, este estudo teve como objetivo principal avaliar a resistência de dez populações de R. microplus da Região do Vale do Paraíba, estado de São Paulo, ao organofosforado (OF) clorpirifós, por meio do Teste de Pacote de Larvas (TPL) e investigar os mecanismos de resistência presentes. Também foi realizada a caracterização do perfil resistente da cepa denominada PINDA, que demonstrou o maior fator de resistência dentre as cepas estudadas, aos OF clorfenvinfós e clorpirifós, através do TPL, e uma triagem utilizando os acaricidas: doramectina, ivermectina, cipermetrina, fipronil, moxidectina e amitraz, por meio da Dose Diagnóstica (DD). Nos bioensaios TPL e DD, as larvas foram expostas por 24 horas aos acaricidas e após esse período foi feita a contagem para avaliação da mortalidade. Na DD, quatro níveis de resistência foram estabelecidos de acordo com a mortalidade das larvas. Os dados de mortalidade obtidos do TPL, foram submetidos a uma análise Probit para determinação dos valores da concentração letal para 50% (CL50) e os fatores de resistência (FR). As populações de campo foram consideradas resistentes quando a CL50 (IC95%) não se sobrepunha ao da cepa suscetível e o FR ≥ 2. A fim de investigar o mecanismo de resistência a OF, foram realizados ensaios de inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE) utilizando propoxur. Além disso, 5 amostras de cada cepa foram submetidas ao sequenciamento de Sanger para identificar possíveis mutações nos genes que codificam as enzimas AChE1 e AChE2. Nos bioensaios das populações de campo do Vale do Paraíba, os resultados demonstraram que 90% das cepas eram resistentes aos organofosforados (OF). O TPL-DD confirmou a multirresistência a carrapaticidas na cepa PINDA para cipermetrina, clorpirifós e amitraz. Enquanto, para as lactonas macrocíclicas (doramectina e moxidectina) se mostraram suscetíveis. Com relação aos OF, a cepa PINDA apresentou fator de resistência (FR) de 24,3 para clorpirifós e 10,3 para clorfenvinfós. No teste com inibidor enzimático, todas as cepas apresentaram diferença estatística em relação à cepa suscetível. Foi possível também identificar 14 mutações na sequência de aminoácidos da AChE1 e 19 na sequência da AChE2. Dentre essas mutações, 9 são inéditas, sendo 3 na AChE1 e 6 na AChE2. Esses achados sugerem que a resistência das cepas de campo aos organofosforados está associada à insensibilidade do sítio-alvo.

2025-01-01T00:00:00Z