Perfil Proteômico após Infecção por BVDV (Vírus da Diarreia Viral Bovina) em Células MDBK

Abstract

O setor do agronegócio contribui com grande impacto no desenvolvimento da economia brasileira, além de estar relacionado diretamente ao crescimento do Produto Interno Bruto (PIB). A importância da pecuária bovina no desenvolvimento da economia é um dos principais destaques do agronegócio. Deste modo, o surgimento de divergentes técnicas sanitárias torna-se imprescindível no controle e disseminação de agentes patogênicos. O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um dos principais patógenos que afetam os bovinos, responsável por grandes perdas econômicas na pecuária. Pertencente à família Flaviviridae, gênero Pestivirus, apresenta distribuição mundial, causando divergentes problemas no âmbito reprodutivo (infertilidade, repetição de cios, abortamentos e mal-formações fetais). Apresenta-se sob as formas não citopatogênica (NCP) e a citopatogênica (CP). As abordagens proteômicas surgem amplamente com o objetivo de elucidar os processos fisiológicos proteicos, através de técnicas de quantificação, identificação e, por fim, caracterização de proteínas em meio de cultivo celular. Os objetivos do presente trabalho foram verificar os possíveis efeitos do BVDV CP, quando isolados em células MDBK, além de identificar e comparar utilizando análise proteômica, o perfil de glicoproteínas presentes no meio de cultivo de células MBDK infectadas ou não com o vírus; além de também selecionar possíveis biomarcadores moleculares relacionados à interação BVDV-células MBDK. Na primeira fase do experimento, foram analisados 8 cultivos contendo monocamadas de células MDBK, inoculadas com o vírus BVDV CP. Após várias observações em horários distintos, observou-se um ECP gradativo nas células inoculadas com o vírus CP. Na segunda fase, amostras de meio de cultivo das células MDBK, foram submetidas à extração de proteínas para análise proteômica. Para cada amostragem, foram obtidos géis bidimensionais representativos, os quais foram analisados com relação a expressão diferencial de proteínas. A análise utilizando a Espectometria de Massa (MS) identificou 55 proteínas, sendo que grande parte delas apresentou expressão alterada. Cada proteína identificada foi representada baseada na busca de similaridade com outras sequencias de proteínas já depositadas no NCBI. Proteínas de importante papel na resposta de defesa ao vírus e resposta imune foram identificadas.