Impacto da diarréia viral bovina na produção In Vitro de embriões bovinos

Abstract

A produção in vitro de embriões (PIVE) tem grande impacto para a bovinocultura e consequentemente para a economia brasileira, visando o aumento da produção, melhoramento genético do rebanho e maior número de descendentes de animais com alto valor zootécnico. O Brasil tem o maior rebanho comercial de bovinos e é o país que mais cresce em números de embriões produzidos e transferidos, porém existem pontos críticos à esclarecer, principalmente relacionados à sanidade dos embriões e o risco de transmissão de agentes infecciosos durante o processo. Os vírus são os agentes de maior importância, podem entrar em contato com os embriões de diversas maneiras, por meio de insumos de origem animal utilizados nos meios de cultivo dos embriões, sêmen e oócitos, e também pela manipulação humana durante a PIVE. Muitas vezes a infecção viral pode passar despercebida durante todo o processo tendo em vista que nem todos os agentes virais alteram as características dos embriões, mantendo simetria e presença/ausência de fragmentação. Dentre os vírus de maior importância na bovinocultura, destaca-se o vírus da diarreia viral bovina (BVDV). É um RNA vírus de fita simples, envelopado e que pertence à família Flaviviridae e ao gênero Pestivírus, classificado em três genótipos (BVDV-1, 2 e 3), e dois biótipos diferentes: citopáticos e não citopáticos. Este vírus causa impactos na bovinocultura devido ao desenvolvimento de sinais clínicos no trato respiratório, digestivo e principalmente no trato reprodutivo. Pode causar abortamento, mal formações, repetições de cio, nascimento de animais fracos e ainda nascimento de animais persistentemente infectados (PI) pelo vírus, os quais irão se tornar a principal fonte de infecção para o restante do rebanho. Neste trabalho foram realizados cinco experimentos, com os três genótipos e biótipos diferentes de BVDV para a contaminação experimental, a qual ocorreu na fase de maturação dos oócitos (provenientes de abatedouro). Os dois primeiros experimentos, os oócitos foram expostos à oito diluições do vírus BVDV-1 NADL e BVDV-3 não citopático e os meios utilizados continham soro fetal bovino (SFB). Nos três experimentos seguintes, os oócitos foram expostos à quatro diluições dos três genótipos do vírus, todos não citopáticos, e foi utilizado substituto sintético de soro. Foram analisadas as taxas de clivagens, de embriões viáveis e degenerados, frente à exposição aos vírus em diversas doses virais, além do grupo controle, que não teve exposição aos vírus. Além da avaliação da formação e desenvolvimento dos embriões, número de embriões produzidos viáveis e degenerados, também foram realizadas análises por RT-qPCR para detecção do vírus durante todas as etapas da PIVE. Verificou-se que a presença do vírus afetou a taxa de clivagem e de embriões produzidos, com maior número de estruturas degeneradas naquelas diluições em que o vírus estava mais concentrado, principalmente para BVDV-3. Na análise por RT-qPCR, os vírus foram detectados em praticamente todas as etapas do processo da PIVE, inclusive nos embriões viáveis que foram lavados segundo recomendações da IETS, as lavagens não foram eficientes na remoção de todos os vírus, apenas para o BVDV-1 NADL. Nos experimentos em que foi feita a substituição do SFB nos meios, a taxa de embriões viáveis produzidos foi drasticamente afetadaA aplicação do teste de RT-qPCR para análise de embriões degenerados permite identificar o risco de contaminação por BVDV do lote de embriões em questão, este é um passo fundamental para uma estratégia de diagnóstico eficiente e confiável. Estes dados permitem uma discussão sobre quais são as melhores alternativas para estabelecer protocolo sanitário para certificação de embriões livres de BVDV na PIVE.