Análise da eficiência e do custo-benefício da RT-PCR em tempo real no dia- gnóstico da diarreia viral bovina

Abstract

O Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), pertencente à família Flaviviridae, gênero Pestivírus, está disseminado pelo mundo e ocasiona perdas econômicas para os rebanhos de produção. Os ensaios imunoenzimáticos para captura de antígeno (ELISAAg) e a transcrição reversa seguida pela reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR) têm sido utilizados no diagnóstico do BVDV. Outra opção disponível é a RT-PCR em tempo real (qRT-PCR), que possui as mesmas vantagens da reação convencional - uma técnica bastante sensível e específica, capaz de detectar pequenas concentrações de vírus, mesmo os não viáveis -, mas que, além disso, permite a mecanização do processo e leitura do resultado através de fluorescência, conjunto esse que o torna mais ágil e de maior confiança. Objetivou-se: (I) Validar a qRT-PCR para o diagnóstico do BVDV, (II) avaliar a relação custo-benefício da qRT-PCR, em comparação a RT-PCR convencional, (III) comparar os resultados de amostras teste analisadas pela RT-PCR convencional, qRTPCR, ELISAAg. Foram analisados pelos três métodos citados acima, 172 lotes de soro fetal bovino (SFB), recebidos pelo Laboratório de Viroses de Bovídeos do Instituto Biológico de São Paulo, no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2012. A sensibilidade analítica da RT-PCR convencional ficou em 101 TCID50/50µL para BVDV-1 e 100 TCID50/50µL para BVDV-2, enquanto que a validação da qRT-PCR revelou que o teste detecta até 101 cópias de RNA/µL. Quando comparado os resultados das amostras de SFB naturalmente contaminados, detectou-se, pelo teste ELISAAg, 19,19% (33/172) de positivas para o BVDV, na RT-PCR convencional 70,34% (121/172) de positivas e na qRT-PCR 81,97% (141/172), o que demonstra um melhor desempenho aos métodos moleculares, provavelmente devido à interferência de anticorpos presentes nos lotes de SFB quando realizado o ELISAAg ou devido à incompatibilidade de reagentes utilizados na produção do Kit em relação às cepas virais locais. A análise custo-benefício revelou ser a qRT-PCR 25,5% mais econômica e também mais vantajosa do que a reação convencional.