Viroides em crisântemo: levantamento, identificação, caracterização, avaliacão de fontes de resistência e desenvolvimento de métodos de diagnóstico

Abstract

No Brasil, o mercado de flores e plantas ornamentais movimenta, anualmente, cifras superiores a quatro bilhões de reais. O crisântemo (Dendranthema spp., Asteraceae) se destaca por seu alto valor comercial, sendo produzido em mais de 100 municípios do estado de São Paulo. As doenças causadas por vírus e viroides têm se tornado um problema nos sistemas de produção de crisântemo devido, principalmente, à propagação vegetativa, que facilita a disseminação desses patógenos. Os viroides causam prejuízos à cultura, destacando-se: o Chrysanthemum chlorotic mottle viroid (CChMVd) que induz amarelecimento generalizado das plantas; e o Chrysanthemum stunt viroid (CSVd), que causa nanismo, retarda o florescimento, podendo, em muitas situações, não induzir sintomas visíveis, facilitando sua disseminação no campo, além de passar despercebido ao cruzar fronteiras internacionais. No Brasil, há somente um relato da possível ocorrência do CSVd em crisântemo no estado de São Paulo. O presente projeto teve como objetivos: (i) realizar levantamento, identificar e caracterizar os viroides presentes em cultivos de crisântemo no estado de São Paulo; (ii) desafiar variedades de crisântemo com um isolado do CSVd; (iii) desenvolver métodos de diagnóstico para fortalecer os programas de quarentena e indexação. O levantamento indicou que o CSVd encontra-se amplamente disseminado nos cultivos de crisântemo no estado de São Paulo. As variedades de crisântemo avaliadas mostraram-se suscetíveis, apesar de não apresentarem sintomas. Das técnicas de diagnóstico utilizadas, sPAGE se mostrou eficiente, apesar de ser trabalhosa e requerer treinamento para a obtenção e interpretação dos resultados. O desenvolvimento de oligonucleotídeos específicos para RT-PCR convencional e RT-qPCR permitiu o emprego dessas técnicas para diagnóstico do CSVd com sensibilidade 100.000 vezes maior que sPAGE. A hibridização dot-blot também se mostrou sensível e útil para o diagnóstico de um grande número de amostras. O sequenciamento do genoma de um isolado do CSVd revelou elevada identidade de nucleotídeos quando comparado com outros isolados depositados no GenBank apresentando pouca variabilidade genética. Esta é a primeira identificação e caracterização molecular de um isolado de CSVd no Brasil.