Desenvolvimento de metodologia de PCR multiplex para diagnose simultânea de Pseudomonas syringae pv. garcae e Pseudomonas syringae pv. tabaci e influência do nitrogênio no crescimento vegetativo do cafeeiro e severidade da mancha aureolada

Abstract

A mancha aureolada, causada pela bactéria Pseudomonas syringae pv. garcae, e uma doença cuja importância aumentou nos últimos anos na cultura do cafeeiro no Brasil. Outras bacterioses também afetam as folhas de cafeeiro e infecções mistas de P. syringae pv. garcae e Pseudomonas syringae pv. tabaci foram encontradas em 2017 no estado do Paraná. As técnicas utilizadas rotineiramente para o diagnóstico destas bacterioses consomem recursos e tempo. No presente estudo, foram avaliadas as sequências dos genes dsbA, gyrB, rpoD, recA, rpoB, rpsLG e fusA, para a detecção de possíveis regiões para desenho de primers a serem utilizados em reação de PCR para detecção de P. syringae pv. garcae e P. syringae pv. tabaci. A partir das sequências do gene rpoD foi possível desenvolver dois primers, Psg3F para detecção P. syringae pv. garcae, que amplificou um fragmento de 275 pb com sensibilidade de 0,001 ng e Pst3F para detecção P. syringae pv. tabaci que amplifica um fragmento de 585 pb com sensibilidade de 0,01 ng. Estes primers podem ser utilizados simultaneamente em uma reação de PCR Multiplex para detectar ambos os patógenos, tanto a partir de DNA extraído, quanto a partir de suspensões bacterianas fervidas. Esta técnica permite maior precisão e redução no tempo utilizado para o diagnóstico de ambas as bacterioses. A severidade da mancha aureolada tem sido relacionada a variações na nutrição nitrogenada da cultura do cafeeiro, em condições de campo e viveiro. Visando a avaliar o efeito do nitrogênio (N) sobre o crescimento de plantas e a severidade da mancha aureolada, foram realizados dois experimentos em condições de hidroponia com mudas de café de cultivares suscetíveis (Bourbon e Catuaí Vermelho IAC 144) e resistente (IPR 102). As mudas foram cultivadas em soluções nutritivas com 0, 5, 10 e 15 mmol L-1 de (N) e inoculadas com P. syringae pv. garcae. As mudas que receberam N apresentaram maior teor de N nas folhas, maior crescimento da parte aérea, número de folhas e massa seca da parte aérea. As mudas das cultivares suscetíveis apresentaram maior severidade da mancha aureolada na solução sem N, redução na severidade nas soluções com 5 e 10 mnol de N.L-1 e aumento da severidade na solução com 15 mnol de N.L-1. As mudas da cultivar IPR 102 mantiveram a resistência à mancha aureolada em todas as soluções estudadas.